線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。通過(guò)細(xì)胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測(cè)到細(xì)胞膜電位的下降，同時(shí)也可以用細(xì)胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。單體的Zui大激發(fā)波長(zhǎng)為 515nm，Zui大發(fā)射波長(zhǎng)為529nm；聚合物的Zui大激發(fā)波長(zhǎng)為585nm，Zui大發(fā)射波長(zhǎng)為590nm 。實(shí)際觀察時(shí)，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。

　　

　　染色步驟：

　　1、于6-，12或24-孔板上進(jìn)行細(xì)胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。 注：進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)時(shí)的細(xì)胞密度建議不超過(guò)1×106 cells/mL，也可根據(jù)自己的細(xì)胞類型培養(yǎng)至合適的密度。

　　2、取0.5 mL細(xì)胞懸液至無(wú)菌的離心管內(nèi)。

　　3、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。

　　4、用0.5 mL細(xì)胞膜熒光探針工作液重懸細(xì)胞，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進(jìn)行充分的染色。

　　5、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。

　　6、用2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。

　　7、重復(fù)步驟6。

　　8、用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，即可進(jìn)行后續(xù)的流式分析。

　　

　　注意事項(xiàng)：

　　1、如果一次使用量較小，需把每管再適當(dāng)進(jìn)行分裝，盡量避免反復(fù)凍融。

　　2、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。